1.β-Actin抗体

β-Actin(肌动蛋白，细胞骨架蛋白)，375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。β-Actin作为内参是得到公认的，针对大多数组织和细胞来说，它广泛分布于细胞质内，表达量非常丰富。但是在一些少量特殊的情况下比如脂肪组织和细胞内，β-Actin的表达量就很少。

2.GAPDH抗体

GAPDH(甘油醛 -3- 磷酸脱氢酶)，是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织细胞中都高水平表达，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响，广泛用作WB蛋白质标准化的内参。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，会增加GAPDH在特定细胞和组织中的表达。

用HEK-293、Hepal-6、PC12、CHO-K1、MDCK细胞进行WB验证分析，上样后120V进行电泳，300mA、1.5h进行转膜，转膜结束后用5%脱脂奶粉封闭2h，使用β-Actin抗体 (Catalog#GM-77430AB)(1:1000 稀释)，在摇床上4℃孵育过夜，用1×TBST清洗三次后添加二抗，摇床室温孵育2-3h，用1×TBST清洗三次后进行显影。

用HEK-293、Jurkat、PC12、WSL、Hepal-6和MDCK细胞进行WB验证分析。上样后，在120V下电泳，然后在300mA下转膜1.5h。转膜结束后用5%脱脂奶粉封闭两h。使用GAPDH抗体 (Catalog#GM-77904AB)(1:1000 稀释度)，4℃摇床孵育过夜，加入二抗前用1×TBST冲洗三次，室温摇床孵育2-3h，显像前用1×TBST冲洗三次。