慢病毒 (lentivirus, LV) 是目前细胞及模式生物实验中非常有效的基因研究工具。
慢病毒属于逆转录病毒科，是二倍体RNA病毒。慢病毒对于分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，同时能将外源基因高效整合至靶细胞染色体，实现长期稳定表达，且构建后的载体可携带更长的目的基因。
慢病毒 (lentivirus, LV) 是目前细胞及模式生物实验中非常有效的基因研究工具。
慢病毒属于逆转录病毒科，是二倍体RNA病毒。慢病毒对于分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，同时能将外源基因高效整合至靶细胞染色体，实现长期稳定表达，且构建后的载体可携带更长的目的基因。
- 宿主广泛：可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞多种类型细胞，尤为适合质粒转染效率低的细胞；
- 可实现稳定表达：慢病毒通过将外源基因有效整合到宿主染色体上，可实现目的基因长时间稳定表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选；
- 安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T治疗作用于人体；
- 适用范围广：可用于体外细胞系和活体动物模型，研究基因功能；
- 实现可调控表达：经过特定的元件修饰的慢病毒表达载体，可只在特定的外源或内源物质的作用下才进行表达，从而调控目的基因定时、定量表达。
不同病毒特性比较
慢病毒包装系统一般慢病毒表达载体（又称穿梭载体）和慢病毒包装载体组成。
常用的慢病毒包装系统为二代（三质粒）或三代（四质粒）包装系统。其中三代系统具有更好的生物安全性，因而应用更为广泛。
常用慢病毒包装系统
 |
1. 准备质粒：构建目的基因慢病毒质粒及慢病毒辅助质粒；
2. 转染细胞：目的基因慢病毒质粒及辅助质粒共转293T细胞进行慢病毒包装；
3. 收集上清：转染48-72小时后，收集含有病毒的细胞培养上清。
4. 浓缩纯化：对上清进行浓缩和纯化（如超速离心）。
5. 滴度测定：测定病毒的滴度，滴度测定常规方法为荧光稀释法、RT-qPCR、抗生素筛选法、ELISA检测法。 |
案例一
Tissue Factor-Targeted ImmunoPET Imaging and Radioimmunotheray of Anaplastic Thyroid Cancer
发表期刊：Advanced Science
影响因子：17.5213
发表单位：上海交通大学医学院附属仁济医院
吉满助力：
本研究借助pGMLV-CMV-Lu (Genomeditech) 慢病毒标记THJ-16T肿瘤细胞，并成功构建了甲状腺癌 (ATC) 动物模型。64Cu-NOTA-ALT-836在皮下ATC模型中的免疫PET成像如图，在注射示踪剂48小时后，最大强度投影 (MIP，图A) 和冠状位 (图B) 免疫PET图像很好地显示了THJ-16T肿瘤的清晰轮廓，白色虚线圈表示肿瘤。
案例二
DOT1L Regulates Thermogenic Adipocyte Differentiation and Function via Modulating H3K79 Methylation
发表期刊：Diabetes
影响因子：7.7
发表单位：中国科学院上海药物研究所
吉满助力：
为了验证DOT1L以细胞自主的方式调节棕色和米色脂肪细胞的发育和功能，作者分别从条件Dot1Lflox/flox小鼠的肩胛间BAT或WAT中分离原代SVF细胞，并在体外诱导它们成为棕色或米色脂肪细胞。然后使用表达Cre的慢病毒 (Genomeditech Co.,Ltd.) 来稳定删除DOT1L。通过mRNA表达分析和H3K79甲基化表达分析证实Cre处理的BAT-SVF细胞中Dot1L和H3K79甲基化的有效缺失 (图A和B)。其次，还发现DOT1L的缺失显着促进棕色脂肪细胞分化，如油红O染色所示 (图C和D)。
案例三
建立Hertwig上皮根鞘原代细胞 (HERS) 永生化细胞系
研究中使用pGMLV-SV40T-PURO (Genomeditech Co.Ltd.) 转染原代分离的1代HERS细胞，采用有限稀释方法筛选并鉴定得到可培养超过50代以上的单克隆细胞HERS-H1和HERS-C2。通过CCK-8法、免疫荧光染色和real-time PCR检测了HERS-H1和HERS-C2细胞的增殖、上皮-间充质转化能力和上皮-间充质相互作用等特征。HERS-C2细胞具有EMT特征，在体外可分化为牙骨质形成细胞，在体内可生成牙骨质样组织。HERS-H1能诱导DPCs在体外向成牙本质细胞分化，在体内生成牙本质样组织。
(来源于Stem Cell Res. Ther. (lF: 7.5; Q1). 2019 Jan 3;10(1):3. DOl: 10.1186/s13287-018-1106-8)
慢病毒 (lentivirus, LV) 是目前细胞及模式生物实验中非常有效的基因研究工具。
慢病毒属于逆转录病毒科，是二倍体RNA病毒。慢病毒对于分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，同时能将外源基因高效整合至靶细胞染色体，实现长期稳定表达，且构建后的载体可携带更长的目的基因。
- 宿主广泛：可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞多种类型细胞，尤为适合质粒转染效率低的细胞；
- 可实现稳定表达：慢病毒通过将外源基因有效整合到宿主染色体上，可实现目的基因长时间稳定表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选；
- 安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T治疗作用于人体；
- 适用范围广：可用于体外细胞系和活体动物模型，研究基因功能；
- 实现可调控表达：经过特定的元件修饰的慢病毒表达载体，可只在特定的外源或内源物质的作用下才进行表达，从而调控目的基因定时、定量表达。
不同病毒特性比较
慢病毒包装系统一般慢病毒表达载体（又称穿梭载体）和慢病毒包装载体组成。
常用的慢病毒包装系统为二代（三质粒）或三代（四质粒）包装系统。其中三代系统具有更好的生物安全性，因而应用更为广泛。
常用慢病毒包装系统
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1. 准备质粒：构建目的基因慢病毒质粒及慢病毒辅助质粒；
2. 转染细胞：目的基因慢病毒质粒及辅助质粒共转293T细胞进行慢病毒包装；
3. 收集上清：转染48-72小时后，收集含有病毒的细胞培养上清。
4. 浓缩纯化：对上清进行浓缩和纯化（如超速离心）。
5. 滴度测定：测定病毒的滴度，滴度测定常规方法为荧光稀释法、RT-qPCR、抗生素筛选法、ELISA检测法。 |
案例一
Tissue Factor-Targeted ImmunoPET Imaging and Radioimmunotheray of Anaplastic Thyroid Cancer
发表期刊：Advanced Science
影响因子：17.5213
发表单位：上海交通大学医学院附属仁济医院
吉满助力：
本研究借助pGMLV-CMV-Lu (Genomeditech) 慢病毒标记THJ-16T肿瘤细胞，并成功构建了甲状腺癌 (ATC) 动物模型。64Cu-NOTA-ALT-836在皮下ATC模型中的免疫PET成像如图，在注射示踪剂48小时后，最大强度投影 (MIP，图A) 和冠状位 (图B) 免疫PET图像很好地显示了THJ-16T肿瘤的清晰轮廓，白色虚线圈表示肿瘤。
案例二
DOT1L Regulates Thermogenic Adipocyte Differentiation and Function via Modulating H3K79 Methylation
发表期刊：Diabetes
影响因子：7.7
发表单位：中国科学院上海药物研究所
吉满助力：
为了验证DOT1L以细胞自主的方式调节棕色和米色脂肪细胞的发育和功能，作者分别从条件Dot1Lflox/flox小鼠的肩胛间BAT或WAT中分离原代SVF细胞，并在体外诱导它们成为棕色或米色脂肪细胞。然后使用表达Cre的慢病毒 (Genomeditech Co.,Ltd.) 来稳定删除DOT1L。通过mRNA表达分析和H3K79甲基化表达分析证实Cre处理的BAT-SVF细胞中Dot1L和H3K79甲基化的有效缺失 (图A和B)。其次，还发现DOT1L的缺失显着促进棕色脂肪细胞分化，如油红O染色所示 (图C和D)。
案例三
建立Hertwig上皮根鞘原代细胞 (HERS) 永生化细胞系
研究中使用pGMLV-SV40T-PURO (Genomeditech Co.Ltd.) 转染原代分离的1代HERS细胞，采用有限稀释方法筛选并鉴定得到可培养超过50代以上的单克隆细胞HERS-H1和HERS-C2。通过CCK-8法、免疫荧光染色和real-time PCR检测了HERS-H1和HERS-C2细胞的增殖、上皮-间充质转化能力和上皮-间充质相互作用等特征。HERS-C2细胞具有EMT特征，在体外可分化为牙骨质形成细胞，在体内可生成牙骨质样组织。HERS-H1能诱导DPCs在体外向成牙本质细胞分化，在体内生成牙本质样组织。
(来源于Stem Cell Res. Ther. (lF: 7.5; Q1). 2019 Jan 3;10(1):3. DOl: 10.1186/s13287-018-1106-8)
