背景介绍
基因过表达(gene overexpression)是将目的基因编码区序列(CDS)克隆到相应的质粒或病毒载体上，利用载体骨架上构建的调控元件，使基因可以在人为的控制条件下实现大量转录和翻译，从而实现目的基因的过表达。此外，还可以选择报告基因进行示踪或抗性基因进行筛选。
基因过表达研究应用
常用的基因表达载体有质粒载体和病毒载体，病毒载体又包括：腺相关病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和逆转录病毒载体等，广泛应用于体外和体内基因功能研究。
有哪些常见类型的过表达
常规蛋白表达
常规蛋白表达的同时可以为蛋白表达添加融合或非融合的荧光标签，亲和标签，亚细胞定位系列等不同类型的修饰。
非编码RNA表达
与常规蛋白表达不同的是，由于非编码RNA(链接非编码RNA介绍)仅仅转录但不翻译，无蛋白产生，因此此类表达载体(尤其是lncRNA)最好独立表达荧光蛋白，且常规蛋白表达的修饰基本不能使用。目前常见的非编码RNA主要为microRNA、lncRNA、circRNA三大类，表达载体与之对应。
【吉满生物】基因过表达工具介绍（上）
一、质粒载体
在生物医学领域，利用常规转染将质粒载体转到动物细胞中仍然被大多数实验室使用。主要因为常规质粒基因表达载体在技术上的简便性以及在各类细胞中的高效转染率。
载体特点
1.过程较简单：相比病毒载体要进行病毒包装，常规质粒载体通过常规转染即可把质粒转入细胞；
2.载体容量大：有足够大的容量可以放置用户所感兴趣的序列；
3.表达水平高：可以产生非常高的拷贝数，使外源基因能高水平的表达，但不同细胞类型拷贝数也有差异；
4.表达时间短：瞬时转染，在细胞里以游离DNA的状态存在，表达时间持续3-7天；
5.转染差异大：不同类型的细胞质粒转染效率差异较大，非分裂细胞比分裂细胞难转染，原代细胞比永生化细胞难转染。
吉满服务
吉满生物拥有丰富的质粒构建经验，能为客户提供高拷贝复制能力且对细胞具有高效转染率的质粒载体，同时可根据客户需求对转染了该载体的细胞进行筛选和可视化追踪。
二、慢病毒载体
慢病毒载体来源于人类免疫缺陷病毒HIV，属于逆转录病毒家族。由于具有目的基因和启动子选择的灵活性以及转染细胞类型的广泛性，使得慢病毒载体系统成为倍受欢迎的外源基因表达系统。
慢病毒重组载体构建完成后需要辅助质粒的参与才能包装形成病毒颗粒。通过对上清液中活体病毒的直接收集或进一步浓缩病毒后可用于转染靶细胞，释放到宿主细胞中的病毒RNA逆转录成双链DNA，进一步整合到宿主细胞的基因组中。
载体特点
1.感染谱广：可有效感染肿瘤细胞、神经元、心肌细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型细胞；
2.稳定表达：通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长期稳定表达，不随细胞分裂传代而丢失；
3.安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T治疗作用于人体；
4.免疫原性低：体内注射不会引起明显的免疫反应，适用于动物实验；
5.包装容量有限：插入的外源基因需在4kb以下；
6.包装滴度较低：相比腺病毒与腺相关病毒，慢病毒包装滴度稍低。
吉满服务流程
吉满生物专注病毒包装，拥有非常丰富的慢病毒包装经验，能对大多数宿主细胞具有高效的转导能力，能有效的把载体整合到靶细胞基因组，并实现外源基因的高水平表达。
三、腺相关病毒载体
腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)是一类无法自主复制的二十面体微小病毒。通常情况下，只有在辅助病毒的参与下，才能进行复制。
腺相关病毒(AAV)载体系统是对腺相关病毒进行优化的一种基因传递系统。AAV重组载体构建完成后与辅助质粒一起转染进入包装细胞，包装成病毒颗粒。纯化后，转导进入宿主细胞，线性双链DNA基因组以游离DNA的形式存在于细胞核中。辅助质粒能够代替辅助病毒，帮助AAV实现自我复制，从而提高载体系统的生物安全性。
载体特点
1.特异性好：AAV血清型种类繁多，不同血清型在感染时具有不同的组织器官偏好性，实现感染特异性；
2.扩散性强：AAV体积小、滴度高，因此具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性，能够大面积感染组织；
3.安全性高：目前已经有多项基于AAV载体的治疗药物被应用于临床，表现出很高的安全性；
4.免疫原性低：重组AAV不带有病毒功能及结构蛋白，用于基因治疗基本不引起免疫反应；
5.局限性：适合在体实验，体外实验转染效率较低；外源基因需较长时间开始表达；载体容量小，目前最多容纳5kb外源DNA。
吉满服务流程
吉满生物的AAV载体经过优化后，是一个包装病毒滴度高，细胞转导效率高，转基因水平表达高的载体系统，具有极高的生物安全性，同时可以根据客户需求使用不同的衣壳蛋白包装病毒，赋予病毒不同的血清型。
